Лабораторная диагностика сибирская язва

Лабораторная диагностика сибирская язва

Лабораторная диагностика сибирской язвы в первую очередь предусматривает выделение возбудителя. Основная схема лабораторного исследования патологического материала включает: микроскопию окрашенного мазка, посев на питательные среды, заражение лабораторных животных.

Перед микроскопированием мазок окрашивают по Граму раствором Ребигера. Микроскопию можно сочетать с люминесцентно-серологическим анализом. При окраске по Ребигеру капсулы приобретают красно-фиолетовый цвет, бактерии — темно-фиолетовый. Сибиреязвенные бактерии, обработанные люминесцирующей сывороткой, дают яркое свечение периферии клетки с обнаружением характерной морфологии.

В качестве сигнальных используют люминесцентно-серологический метод, пробу со специфическим бактериофагом, методы выявления капсулообразования на среде ГКИ или посредством ускоренной биопробы (внутрибрюшинным заражением мышей).

Для быстрой дифференциации колоний сибиреязвенного микроба от колоний спорообразующих сапрофитов при исследовании как материала от больного, так и объектов внешней среды используется дифференциально-диагностическая среда производства Ставропольского НИИВС. Принцип работы со средой основан на обнаружении фосфатазной активности спорообразующих сапрофитов. Сибиреязвенный микроб фосфатазной активностью не обладает. Первичные посевы или пересевы подозрительных культур инкубируют на этой среде при 37±1°С в течение 18-24 ч. При наличии роста в крышку чашки Петри вносят 1-2 мл 25% водного раствора аммиака.

Чашку (крышкой вниз) выдерживают при 20 ± 2° С в течение 1 мин, после чего проводят учет теста. Колонии сапрофитов окрашиваются в розовый цвет, колонии сибиреязвенного микроба остаются бесцветными.

В целях выделения чистой культуры производят посев на МПА и МПБ. После подращивания выделенные культуры идентифицируют на основании наиболее характерных для возбудителя сибирской язвы признаков: ставят пробы с сибиреязвенным бактериофагом, пенициллином (тест «жемчужного ожерелья»), выявляют отсутствие гемолиза, летициназной и фосфатазной активности, оценивают способность к капсулообразованию.
Заражение лабораторных животных имеет целью как выделение чистой культуры, так и оценку ее вирулентности (на основании определения ДСЛ и ЛД50).

Лабораторная работа по выделению и дифференциации палочки сибирской язвы должна проводиться в особых режимных условиях, предупреждающих возможность инфицирования персонала и обсеменения окружающей среды.

В качестве диагностического теста используется также кожная аллергическая проба с аллергеном-антраксином. Внутрикожная инъекция антраксина в случае наличия у человека заболевания сибирской язвой влечет развитие гиперемии и инфильтрата. Реакцию с антраксином ставят на внутренней поверхности верхней трети предплечья. Антраксин вводят с соблюдением правил асептики строго внутрикожно в дозе 0,1 мл. В кожу другого предплечья в качестве контроля вводят в той же дозе другим шприцем стерильный 0,9% раствор натрия хлорида. Учет реакции проводят через 24 и 48 ч в соответствии с наставлением по применению препарата.

Положительную антраксиновую пробу не принимают во внимание у лиц, вакцинированных против сибирской язвы в течение предшествовавших 12 мес, а также у лиц, в прошлом переболевших сибирской язвой.

Диагноз сибирской язвы у человека считается установленным при наличии соответствующей клинической картины, эпидемиологического анамнеза, подтвержденных одним из перечисленных способов: выделением возбудителя из патологического материала; обнаружением его в предполагаемом источнике или факторе передачи; положительной пробой с антраксином.

Сибирская язва

Сибирская язва является острым, особо опасным инфекционным заболеванием, возникающим у человека и животных при заражении Bacillus anthracis, протекающим с формированием на коже специфических карбункулов, либо в септической форме. Источником инфекции являются дикие животные и скот, заражение происходит контактным путем. Инкубационный период сибирской язвы в среднем составляет 3-5 дней. Диагностика осуществляется в 3 этапа: микроскопия мокроты или отделяемого кожных элементов, бакпосев, биопробы на лабораторных животных. Лечение сибирской язвы осуществляется пенициллинами. При кожной форме оно сочетается с местным лечением язв и карбункулов.

Сибирская язва

Сибирская язва является острым, особо опасным инфекционным заболеванием, возникающим у человека и животных при заражении Bacillus anthracis, протекающим с формированием на коже специфических карбункулов, либо в септической форме.

Характеристика возбудителя

Bacillus anthracis представляет собой крупную, капсулированную, грамположительную, факультативно-анаэробную, спорообразующую бактерию палочковидной формы с обрубленными концами. Споры образует при соприкосновении с кислородом, в таком виде может сохраняться в окружающей среде длительное время (несколько лет в воде, десятилетиями в почве, иногда прорастая и образуя новые споры). Сохраняет жизнеспособность после пяти минут кипячения, погибает только после 12-15 минут воздействия текучего пара, в течение 5-10 минут при температуре 110 °С. Сухому жару температурой 140 °С требуется для уничтожения спор бактерий 3 часа, дезинфицирующим средствам (1% раствор формалина, 10% едкого натра) – 2 часа.

Вегетативные формы во внешней среде неустойчивы, погибают при кипячении и дезинфицировании. Сибиреязвенная палочка выделяет трехкомпонентный экзотоксин (антигенный, отечный и летальный факторы), который довольно нестоек, разрушается при нагревании до 60 °С. Источником и резервуаром сибирской язвы в естественной среде являются травоядные животные, в поселениях – домашний скот (крупный и мелкий). У животных сибирская язва протекает в генерализованной форме, заразность имеет место на протяжении всего заболевания (животные выделяют возбудителя с испражнениями) и в течение 7 дней после смерти (без вскрытия и разделывания туши). Шкура, шерсть и продукты их переработки могут сохранять заразность на протяжении многих лет.

Заражение животных происходит при употреблении пищи или воды, содержащих споры сибирской язвы, либо при укусах насекомых, переносящих возбудителя от больных животных, зараженных трупов, загрязненных спорами объектов. Особую опасность представляют сохраняющиеся в почве споры, формирующие эпидемический очаг, который может быть затронут при проведении строительных, гидромелиоративных, геофизических и других работ, в результате чего споры сибирской язвы выходят на поверхность и могут заражать животных и человека.

Больной человек не представляет значимой эпидемиологической опасности для других людей, но может служить источником инфекции для животных. Механизм передачи сибирской язвы, как правило, контактный (проникновение возбудителя происходит через поврежденные кожные покровы и слизистые оболочки). Чаще всего люди заражаются при контакте с больными животными и переработке туш, изготовлении предметов из животного сырья, кулинарной обработке зараженного мяса. Заболеваемость сибирской язвой подразделяется на профессиональную и бытовую. Случаи реализации пищевого пути передачи, а так же вдыхания бактерий крайне редки.

Естественная восприимчивость человека к сибирской язве невысокая, развитие заболевания происходит у 20% лиц, имевших контакт с возбудителем, но при реализации воздушно-пылевого пути заражения заболеваемость практически стопроцентная. Сибирской язвой чаще заражаются мужчины активного возраста, в основном в сельской местности.

Классификация сибирской язвы

Сибирская язва протекает в двух клинических формах: кожной и генерализованной.

  • Кожная форма, встречающаяся в подавляющем большинстве случаев (95% и более) подразделяется на карбункулезную, буллезную и эдематозную разновидности, в зависимости от характера кожных проявлений.
  • Генерализованная форма также бывает трех видов: легочная, кишечная и септическая.

Симптомы сибирской язвы

Инкубационный период сибирской язвы обычно занимает 3-5 дней, но может затягиваться и до недели – двух, а также протекать в течение нескольких часов. Самая распространенная клиническая форма сибирской язвы: карбункулезная. При этом на коже в месте внедрения возбудителя формируется карбункул, проходя последовательно стадии пятна, папулы, везикулы и язвы. Сначала образуется красное безболезненное пятно, быстро преобразующееся в медно-красную (иногда багровую), приподнятую над поверхностью кожи, папулу. На этом этапе больных обычно беспокоит зуд и некоторое жжение пораженного участка.

Спустя несколько часов папула прогрессирует в наполненную серозной жидкостью везикулу около 2-4 мм в диаметре. Содержимое везикулы вскоре приобретает темный, иногда багрово-фиолетовый, оттенок в результате геморрагии. Вскрываясь (самостоятельно или при расчесывании), везикула образует язву с темно-коричневым дном, приподнятыми краями и отделяемым серозно-геморрагического характера. При типичном течении первичная язва опоясывается новыми везикулами, которые при вскрытии сливаются и увеличивают язвенный дефект.

Спустя несколько дней (иногда до двух недель) в центре язвы формируется черный некротический струп, постепенно замещая все ее дно. На вид карбункул напоминает обгоревшую корку, безболезненный, окружен багрово-красным воспалительным валиком, возвышающимся над непораженной кожей. Ткани вокруг карбункула выражено отечны, нередко отек захватывает значительный участок (в особенности в случае локализации в местах с рыхлой подкожной клетчаткой, на пример, на лице). При расположении карбункула на лице высока вероятность распространения отечности на верхние дыхательные пути и развития угрожающей жизни асфиксии.

Заболевание с самого начала сопровождается значительной интоксикацией (головная боль, слабость, адинамия, ломота в мышцах, пояснице, возможна боль в животе), лихорадкой. Через пять-шесть дней температура тела резко снижается, происходит регресс общих и местных клинических проявлений. Струп отторгается спустя 2-3 недели, язва постепенно заживает, оставляя грубый рубец.

Как правило, карбункул формируется в единичном экземпляре, в редких случаях их количество может достигать 10 и более, что значительно утяжеляет течение заболевания. Наибольшую опасность представляют карбункулы на голове, шее, слизистых оболочках ротовой полости и носа, заметно ухудшающие течение и грозящие осложниться сепсисом.

Эдематозная форма на первом этапе ограничивается отечностью тканей, карбункул формируется позднее и отличается довольно крупными размерами. Буллезная разновидность характеризуется формированием в области входных ворот инфекции наполненных геморрагическим содержимым пузырей, преобразующихся после вскрытия в обширные язвы, прогрессирующие в карбункулы.

При генерализованных формах сибирской язвы характерно преимущественное поражение органов дыхания (легочная форма). Клинические проявления напоминают таковые при гриппе: симптомы интоксикации сопровождаются кашлем, насморком, слезотечением, отмечается учащение дыхания, тахикардия, одышка. Эта фаза заболевания может продолжаться от нескольких часов до двух дней, после чего происходит значительное нарастание признаков интоксикации, лихорадка достигает критических цифр (39-40 градусов), выражен озноб. Иногда в этот период отмечаются боли и стеснение в грудной клетке, при кашле выделяется обильная мокрота с кровянистой примесью, при свертывании напоминающая вишневое желе. В последующем происходит нарастание олигурии, признаков сердечно-сосудистой недостаточности, отека легких. Продолжительность последней фазы заболевания не превышает 12 часов, больные находятся в сознании.

Наиболее тяжело протекает кишечная разновидность генерализованной формы сибирской язвы, имеющая крайне неблагоприятный исход. Первая фаза, так же как и в других случаях характеризуется лихорадкой и выраженной интоксикацией, сопровождающимися жжением и болезненностью в горле, и продолжается до полутора суток, затем к этой симптоматике присоединяется выраженная режущая боль в животе, тошнота, рвота с кровью, диарея. В каловых массах также визуально определяется кровь. В третьей фазе имеет место нарастающая сердечная декомпенсация, лицо приобретает багровый или синюшно-розовый оттенок, отмечаются инъекции склер, на коже могут быть петехиальные или геморрагические высыпания. Больные тревожны, испытывают страх.

Септическая разновидность генерализованной формы протекает в виде первичного или вторичного (явившегося осложнением другой формы сибирской язвы) сепсиса. При этом отмечается очень быстрое нарастание симптоматики интоксикации, многочисленные геморрагии на коже и слизистых, часто поражаются мозговые оболочки. Данная форма, зачастую, прогрессирует с развитием инфекционно-токсического шока.

Осложнения сибирской язвы

Сибирская язва может осложняться менингитами, менингоэнцефалитами, отеком и набуханием головного мозга, отеком легких, асфиксией, перитонитом, желудочно-кишечными кровотечениями и парезом кишечника. Генерализованные формы легко перерастают в сепсис и инфекционно-токсический шок.

Диагностика сибирской язвы

Специфическая диагностика сибирской язвы включает три этапа: микроскопическое исследование биологических материалов (мокрота, отделяемое кожных элементов, плевральный выпот, кал), выделение культуры путем бакпосева на питательных средах и биопробы на лабораторных животных. В качестве серологических методов диагностики применяют реакцию термопреципитации по Асколи, люминесцентный серологический анализ, некоторые другие методики. Больным производят кожно-аллергическую пробу с антраксином.

Рентгенография легких при легочной генерализованной форме показывает картину пневмонии или плеврита. В таких случаях больному сибирской язвой необходима дополнительная консультация пульмонолога. При необходимости проводят плевральную пункцию. В начале заболевания для дифференциации кожных проявлений сибирской язвы требуется консультация дерматолога. Все исследования с сибиреязвенной палочкой производятся в специализированных оборудованных лабораториях в связи с особой опасностью данного заболевания.

Лечение сибирской язвы

Этиотропное лечение сибирской язвы осуществляют пенициллином, назначая его внутримышечно на 7-8 дней или более, до снятия симптомов интоксикации. Внутрь можно назначать доксициклин или левофлоксацин. При тяжелом течении применяют внутривенные инъекции ципрофлоксацина. Одновременно с антибиотикотерапией назначают введение противосибиреязвенного иммуноглобулина (вводится подогретым через полчаса после инъекции преднизолона).

Больным сибирской язвой показана дезинтоксикационная терапия – инфузионное введение дезинтоксикационных растворов с преднизолоном и форсированием диуреза. Тяжелые осложнения лечат согласно разработанным методикам интенсивной терапии. На язвы и карбункулы накладываются асептические повязки. Оперативное удаление карбункулов категорически противопоказано ввиду возможной генерализации инфекции.

Прогноз и профилактика сибирской язвы

Благоприятный прогноз имеют кожные формы сибирской язвы, генерализованные формы нередко заканчиваются летальным исходом. Современные методы лечения способствуют значительному снижению неблагоприятных исходов данного заболевания, поэтому крайне важно своевременное обращение за медицинской помощью.

Санитарно-гигиенические мероприятия по профилактике заболеваемости сибирской язвой включаю ветеринарные и медико-санитарные меры, задачей которых является выявление, контроль и санация эпидемиологических очагов, отслеживание состояния пастбищ, водных источников, животноводческих хозяйств, плановые прививки животных, гигиеническое нормирование при обработке животного сырья, его хранении и транспортировке, захоронении павшего скота.

Индивидуальная профилактика заключается в соблюдении санитарно-гигиенических правил при работе с животными, специфической вакцинопрофилактике для лиц с высокими профессиональными рисками заражения. Выявленные очаги подлежат дезинфекции. Экстренная профилактика осуществляется не позднее 5 суток после контакта с подозрительными объектами, представляет собой курс превентивной антибиотикотерапии.

Лабораторная диагностика сибирская язва

Цель занятия: изучить методы диагностики сибирской язвы. Материалы и оборудование: световой микроскоп, вакцина против сибирской язвы.

Место проведения занятия: лаборатория кафедры эпизоотологии.

Сибирская язва — остропротекающая болезнь сельскохозяйственных животных многих видов. Болеет и человек. Возбудитель — Bacillus anthracis.

При постановке диагноза на сибирскую язву используют весь комплекс диагностических методов — эпизоотологический анализ, клинические, патологоанатомические и лабораторные исследования.

Общий принцип эпизоотологического анализа, или обследовав ния, хозяйства изложен в занятии 6. Возбудитель сибирской язвы может распространяться через секреты и экскреты больных животных, продукты убоя, трупы, а также посредством кровососущих насекомых. Особенно опасны места захоронения трупов животных и стоячие водоемы.

Если болезнь возникла в период стойлового содержания животных, выясняют условия их кормления и происхождение кормов (споры сибирской язвы могут быть занесены с корнеплодами, сеном и мясокостной мукой); если в пастбищный период — обследуют участки, где паслись животные. Необходимо выяснить, велись ли вблизи фермы или пастбищ земляные работы, и собрать сведения за предельно большой срок о случаях появления сибирской язвы в данной местности.

Клиническое обследование животных начинают с измерения температуры тела (при сибирской язве она повышена). Болезнь выражается также отказом от корма, резким припуханием лимфатических узлов, отеком подчелюстного пространства, у дойных коров — Маститом. У свиней обнаруживают разлитую отечность тестоватой Консистенции в подчелюстном пространстве.

При патологоанатомическом исследовании отмечают характерные для сибирской язвы признаки: отсутствие трупного окоченения, сильное вздутие трупа, отеки в подкожной клетчатке, пенисто-кровянистые истечения из естественных отверстий, синюшную окраску видимых слизистых оболочек и кровоизлияния на них. Однако следует иметь в виду, что весь комплекс указанных изменений наблюдают не всегда, поэтому окончательный диагноз устанавливают только после лабораторного исследования.

Лабораторная диагностика при сибирской язве включает в себя микроскопию мазков из исходного патологического материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды, биопробу. При необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры культурально-биохимическими методами.

Для исследования на сибирскую язву в лабораторию направляют ухо, перевязанное у основания, или мазок крови, взятой из надреза уха; от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани и заглоточные, а также другие лимфатические узлы с характерными патологоанатомическими изменениями. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки.

Мазки микроскопируют немедленно, результаты срочно сообщают в хозяйство, направившее материал. Мазки фиксируют этиловым спиртом с добавлением 3 % пероксида водорода, окрашивают по Граму, на капсулы — по методу Ребигера, Михина, Ольта или Романовского— Гимзы и на споры — по методу Пешкова, Ауески, Трихинелье и Златогорова. Если в лаборатории есть люминесцирующие сыворотки, используют метод флюоресцирующих антител.

В мазках, окрашенных по Граму, сибиреязвенные бактерии располагаются короткими цепочками или попарно, концы, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. При окраске на капсулы мазков из свежего материала сибиреязвенные палочки окружены капсулой, из несвежего —бактерии несколько увеличены, иногда отмечают «тени», а вместо капсул — слабоокрашенные обрывки. При обработке препаратов люминесцирующими сыворотками в мазке обнаруживают специфическое свечение, свидетельствующее о наличии в исследуемой пробе возбудителя сибирской язвы.

Посевы из исходного материала делают в МПБ и на МПА или в бульон и на агар Хоттингера. Посевы инкубируют 18…24 ч при температуре 37 °С, при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 ч.

После суточного роста сибиреязвенных бактерий МПБ остается прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок, напоминающий комок ваты. При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья. Мазки из бульонной культуры окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек.

На плотных питательных средах возбудитель сибирской язвы образует плоские матово-серые шероховатые колонии. Центр колоний затемнен, периферия бахромчатая, с локонообразными отростками.

Для биопробы используют лабораторных животных, восприимчивых к сибирской язве: белых мышей, кроликов, морских свинок. Исследуемый материал суспендируют в небольшом объеме 0,9%-го раствора хлорида натрия, вводят двум белым мышам в дозе 0,2…0,5 мл под кожу спины ближе к корню хвоста или 0,5…1,0 мл двум морским свинкам подкожно в область живота. За животными, зараженными суспензией из исходного материала или культурой возбудителя, наблюдают в течение 10 сут. Зараженные животные гибнут через 1…3 сут, иногда позже. Трупы вскрывают, делают мазки и посевы на питательные среды из крови сердца, селезенки, печени, а также инфильтрата, образовавшегося на месте инъекции исследуемого материала.

Сроки исследований: микроскопического — в день поступления материала, бактериологического—до 3 сут, биологического (биопроба) — 10 сут.

Кожевенное сырье на сибирскую язву исследуют в реакции преципитации (РП). Перед ее постановкой свежий патологический материал предварительно выдерживают в термостате в течение 18…20 ч, несвежий сразу экстрагируют горячим или холодным способом. При этом следует учитывать, что в экстрактах, полученных горячим способом, меньше преципитиногенов.

При горячем способе экстрагирования кусочки исследуемого материала (1…2г) помещают в пробирку или колбу, заливают 0,9%-м раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и кипятят 30…40 мин на водяной бане. При холодном кусочки материала (1…2г) растирают в ступке с песком, переносят в колбу или баночку, заливают 0,9%-м фенолизированным раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и оставляют на 16…18 ч при температуре 20 ± 2 °С.

Полученные экстракты фильтруют через асбестовую вату до ‘ прозрачности, при этом первые капли фильтрата удаляют.

РП ставят методом наслаивания или подслаивания.

При наслаивании в уленгутовскую пробирку наливают 0,2…0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между. Компонентами образовалась ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При подслаивании в уленгутовскую пробирку сначала вносят 0,2…0,3 мл экстракта, затем под него осторожно пастеровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.

Если при соединении компонентов резко выраженная граница между ними отсутствует, опыт повторяют. Одновременно ставят контроль преципитируюшей сибиреязвенной сыворотки со стандартным сибиреязвенным антигеном: при положительной реакции в течение 1…2 мин после соединения компонентов появляется характерное кольцо.

РП считают положительной, если через 1…2 мин и не позже чем через 15 мин на границе между компонентами появилось тонкое беловатое кольцо.

При отрицательном результате РП с экстрактом, полученным горячим способом, опыт повторяют с экстрактом, полученным холодным способом.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Приготовить мазки из вакцинного штамма и промикроскопировать их.

2. Разработать схему дифференциальной диагностики сибирской язвы от коликов, тимпании, отравления.

Возбудитель сибирской язвы. Диагностика сибирской язвы, симптомы, лечение

Сибирская язва – это инфекционное заболевание. Оно отличается высокой вероятностью летального исхода. Возбудитель сибирской язвы — Bacillus anthracis. В зоне риска находятся люди, работающие на фермах, так как заражение происходит при контакте с животными. Заболевание сибирская язва, фото результатов которого способно напугать любого, опасно по нескольким причинам: оно достаточно распространено в животном мире, споры возбудителя болезни долго хранятся в почве скотомогильника, болезнь тяжело протекает и дает осложнения.

Возбудителем сибирской язвы является неподвижная крупная бактерия. Находясь в организме человека или животного, она образует капсулу, во внешней среде – спору.

Споры возбудителя заболевания могут около 10 лет сохраняться в почве, а в скотомогильниках – в пять раз дольше. Им не страшны морозы и жара, они способны выжить в растворах хлорной извести и хлорамина, а кипячение они выдерживают в течение 7 минут.

Всем известны случаи, когда возбудитель сибирской язвы использовался террористами и распространялся в конвертах.

Вегетативная форма бактерии быстро погибает после дезинфекции и кипячения. Бактерия сибирской язвы способна перейти в спящую форму и активизироваться при благоприятных окружающих условиях.

С древних времен сибирская язва поражала человечество. Ещё Гомер и Гиппократ упоминали её как «священный уголь». В Средние века это заболевание уносило жизни множества людей и животных в разных странах. Впервые недуг был описан в XVII веке. Российский учёный С.С. Андреевский доказал, что сибирская язва у животных и человека – это одно и то же заболевание, возникающее путем самозаражения. Он же и присвоил этому недугу современное название.

В конце XIX века Луи Пастер смог создать первую вакцину. Он вводил животным ослабленный штамм бактерии сибирской язвы, что приводило к развитию иммунитета. Пастер смог доказать необходимость проведения вакцинации для профилактики болезни.

ВОЗ сообщает о 20 тысячах заболевших сибирской язвой ежегодно. Сейчас ведутся исследования с целью усовершенствования вакцины и увеличения срока её действия. В 2010 году учёные США смогли внедрить ген сибирской язвы в геном табака. Вследствие этих действий в растениях стал вырабатываться антиген, который использовали для создания новой вакцины, практически не вызывающей побочных эффектов.

Эпидемиологический процесс

Человеку сибирская язва передается через домашний скот. Невосприимчивы к этому заболеванию птицы, но они могут переносить споры на перьях, когтях и в клювах.

Сибиреязвенная палочка у больного животного находится в испражнениях, крови, жидкости, выделяемой из носа и рта. В почву и воду возбудитель попадает с мочой и калом.

Грунт на месте падежа больного скота становится заражённым, а дикие животные, растаскивая труп, способны разнести болезнь на много километров.

Заражение от одного человека к другому не происходит, поэтому уровень заболевания у людей напрямую зависит от эпидемии у животных.

Заражение может производиться через почву, при контакте с инфицированными продуктами животноводства, при осуществлении ухода за больными животными, при вскрытии их трупов, через травмы на коже, пищу и вдыхаемый воздух.

В африканских странах, где сибирская язва у животных особо распространена, ее передача человеку может происходить через укус кровососущего насекомого.

Кто находится в группе риска

Существует несколько групп людей, которые особо подвержены риску заражения:

  • ветеринарные работники, контактирующие с животными;
  • изготовители, продавцы, а также покупатели изделий из натурального меха и шерсти, привезённых из регионов, где распространена болезнь;
  • охотники;
  • военнослужащие и другие категории граждан, находящиеся в районах эпидемии;
  • люди, работающие в лабораториях, непосредственно контактирующие с возбудителем сибирской язвы.

Распространённость

Ни в одной стране сибирская язва не уничтожена полностью. Чаще всего она встречается в Африке и Южной Америке, а также в странах азиатского региона. В Европе эпидемия периодически возникает в южной её части, на черноморском и средиземноморском побережьях. Лидерами по количеству больных сибирской язвой являются Турция, Иран и Ирак.

В России чаще всего это заболевание встречается в Северо-Кавказском регионе. Основной причиной его возникновения в нашей стране является убой инфицированного животного без оповещения об этом ветеринарной службы и без проведения необходимых мер обеззараживания.

Особенности распространения болезни:

  • в развивающихся странах заражение происходит после контакта с животным, ухода за ним, убоя;
  • в развитых государствах инфекция передается преимущественно через производственное сырье животного происхождения.

Классификация недуга

Выделяют следующие формы сибирской язвы:

Кожная форма встречается чаще всего (приблизительно в 95% от общего количества случаев). Она может быть карбункулёзной (наиболее часто встречающаяся), буллёзной, эндематозной и эризипелоидной.

Лёгочную и кишечную формы часто объединяют под одним названием – генерализованная, или септическая язва. Реже всего встречается кишечная форма заболевания (менее чем в 1% случаев).

Симптомы и течение заболевания

Скрытый период болезни может продолжаться от нескольких часов до недели. С момента попадания возбудителя к человеку до появления первых симптомов может пройти разное количество времени (в зависимости от пути заражения). При воздушном и пищевом способе инфицирования развитие заболевания происходит молниеносно, и через несколько дней может наступить смерть.

Вне зависимости от формы сибирской язвы механизм её развития одинаков: токсин повреждает сосуды, нарушает их проницаемость, вследствие чего возникает отёк, воспаление и потеря чувствительности.

Наиболее распространена карбункулёзная сибирская язва (фото возбудителя заболевания представлено ниже).

Начало заболевания характеризуется появлением на коже в месте входа инфекции красного пятна, впоследствии превращающегося в папулу, а затем – в везикулу тёмного цвета. Лопнув, везикула трансформируется в язву с приподнятыми краями, вокруг которой могут появиться новые везикулы. Через некоторое время в язве образуется чёрный струп, похожий на обгоревшую кожу. Чувствительность покровов вокруг струпа пропадает. Внешняя его схожесть с углём привела к возникновению старорусского названия сибирской язвы – углевик.

Вокруг поражённой кожи появляется отёк. Он опасен при возникновении карбункула на лице и может привести к отеку дыхательных путей и смерти.

Течение заболевания сопровождается высокой температурой, ломотой, головной болью. Через несколько недель язва заживает и появляется рубец.

Эндематозная сибирская язва отличается отёком, карбункул появляется на более поздней стадии заболевания и отличается большими размерами.

При буллёзной разновидности недуга на месте входа инфекции появляются пузыри, которые после вскрытия превращаются в язвы.

Лёгочную форму недуга часто называют болезнью сортировщиков шерсти. Бактерия сибирской язвы с воздухом попадает в лёгкие, а оттуда – в лимфатические узлы, которые воспаляются. Первоначально у больного наблюдается высокая температура, боль в груди и слабость. По прошествии нескольких дней появляется одышка и снижение уровня кислорода в крови. Попав в лёгкие, возбудитель сибирской язвы быстро распространяется по всему организму человека. Часто появляется кашель с кровью, рентген может показать наличие пневмонии, температура тела больного нередко поднимается до 41 градуса. Возникает отёк лёгких и сердечно-сосудистая недостаточность, как следствие, возможны кровоизлияния в мозг.

После попадания возбудителя в организм человека с едой и питьем развивается кишечная форма сибирской язвы. Первая фаза заболевания длится около 2 дней и сопровождается болью в горле, высокой температурой, лихорадкой. Впоследствии к этим симптомам добавляются рвота с кровью, сильные боли в животе, диарея. Появляется сердечно-сосудистая недостаточность, лицо становится багрового или синюшного цвета, на коже образуются папулы. При кишечной сибирской язве велика вероятность смерти больного.

При септической форме заболевание протекает стремительно, возникает интоксикация, внутренние кровоизлияния. Последствием такого недуга может стать инфекционно-токсический шок.

Диагностика

Лабораторная диагностика сибирской язвы включает следующее:

При кожной форме недуга врач поставит диагноз, основываясь на изменениях кожи больного. Если есть подозрения на лёгочную форму, делают флюорографию и томографию, берут мазки из носа и образцы мокроты.

Возбудители инфекционных заболеваний также могут определяться путём взятия крови на бактериальные культуры, исследования образцов брюшной жидкости, поясничной пункции, анализа кожных соскобов.

Возможные осложнения

Сибирская язва может привести к отеку головного мозга, лёгких, к желудочно-кишечным кровотечениям, менингиту. При генерализованных формах заболевания нередко развивается инфекционно-токсический шок.

Больные должны находиться в инфекционном отделении, при тяжёлом течении заболевания – в палате реанимации. Ни в коем случае нельзя вскрывать карбункул, поэтому перевязки должны осуществляться с особой осторожностью. При генерализованной форме заболевания больной должен быть под постоянным контролем, чтобы вовремя предотвратить токсический шок.

Возбудитель сибирской язвы уничтожается с помощью антибиотиков. Применяют их на протяжении 7–14 дней в зависимости от тяжести заболевания. Одновременно с терапией антибиотиками пациенту вводят противосибироязвенный иммуноглобулин. Поражённые участки кожи обрабатывают антисептиками. В домашних условиях лечение сибирской язвы невозможно.

Выписка больных с кожной формой недуга происходит после рубцевания поражённой кожи, с генерализованной формой необходимо полное выздоровление и двойной отрицательный результат бактериологических исследований.

Чаще всего к смерти приводят лёгочная и кишечная формы заболевания. При кожной сибирской язве полное выздоровление наступает в том случае, если оказана своевременная медицинская помощь.

Люди, контактировавшие с возбудителем сибирской язвы, в течение 60 дней принимают антибиотики.

Профилактика: общие сведения

Производится ветеринарная и медико-санитарная профилактика сибирской язвы.

Ветеринарные службы обязаны выявлять больных животных с последующим лечением или убоем. Павший скот обеззараживают и уничтожают, а в очаге заболевания проводится дезинфекция.

Медико-санитарные службы должны:

  • контролировать соблюдение общесанитарных норм;
  • вовремя проводить диагностику и лечение заболевания;
  • обследовать и дезинфицировать очаг недуга;
  • проводить вакцинацию.

Существует сибироязвенная вакцина, которая надёжно защищает животных от этого заболевания. В фермерских хозяйствах вакцинирование производится поголовно, но не все люди, у которых скот находится в личном владении, понимают необходимость этой процедуры.

«Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы. Методические указания. МУК 4.2.2413-08» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29.07.2008)

УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
29 июля 2008 г.
Дата введения —
1 сентября 2008 года
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА И ОБНАРУЖЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ
СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.2.2413-08
1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека; ФГУЗ Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора; ФГУЗ Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора; ФГУЗ Иркутский научно-исследовательский институт Сибири и Дальнего Востока Роспотребнадзора; ФГУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора; ФГУЗ Противочумный центр Роспотребнадзора; ФГУН Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора; ФГУН Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора; ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 3 июля 2008 г. N 2).
3. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 29 июля 2008 г.
4. Введены в действие с 1 сентября 2008 г.
5. С введением в действие данных Методических указаний при осуществлении государственного санитарно-эпидемиологического надзора методические указания «Лабораторная диагностика сибирской язвы у животных и людей, обнаружение возбудителя в сырье животного происхождения и объектах внешней среды», утвержденные 01.09.86 начальником Главного управления ветеринарии Госагропромкомитета СССР и начальником Главного управления карантинных инфекций Минздрава СССР, применению не подлежат.
1. Область применения
1.1. Настоящие Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами других заинтересованных организаций.
1.2. В Методических указаниях определены порядок забора, хранения, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных и умерших людей, животных с подозрением на сибирскую язву, а также материала из объектов окружающей среды, подозрительного на контаминацию возбудителем данного заболевания.
Список сокращений
ВНИИВВиМ — Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной
вирусологии и микробиологии;
ГИСК — Государственный институт стандартизации и контроля;
ГКИ — Государственный контрольный институт;
ДДМ — диско-диффузионный метод;
ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота;
ИФА — иммуноферментный анализ;
кДа — килодальтон;
ЛФ — летальный фактор;
МПА — мясопептонный агар;
МПБ — мясопептонный бульон;
МПК — минимальная подавляющая концентрация;
МФА — метод флуоресцирующих антител;
ОФ — отечный фактор;
ПА — протективный антиген;
ПЦР — полимеразная цепная реакция;
РНГА — реакция непрямой гемагглютинации;
РТНГА — реакция торможения непрямой гемагглютинации;
«СОПЭК» — среда для сочетанного определения продукции экзотоксина и
капсулы;
ЭДТА — этилендиаминтетераацетата динатриевая соль;
DCL — абсолютная летальная доза;
LD — половинная летальная доза;
50
MLVA — метод анализа областей генома с вариабельным числом тандемных
повторов.
2. Нормативные и методические ссылки
2.1. Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности). СП 1.3.1285-03».
2.2. Санитарные правила «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. СП 1.2.036-95».
2.3. «Сибирская язва. СП 3.1.089-96, ВП 13.3.1320-96».
2.4. Практическое руководство «Специфическая индикация патогенных биологических агентов», 2006.
2.5. Методические указания «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности. МУ 1.3.1794-03».
2.6. Методические указания «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4.2.1890-04».
2.7. Методические указания «Обеззараживание биологического материала и объектов внешней среды, зараженных бактериями I-IV групп патогенности, при исследованиях методом ПЦР. МУ 3.5.5.1034-01».
2.8. Методические рекомендации по использованию этилового спирта с 3% перекиси водорода для фиксации на предметном стекле возбудителя сибирской язвы, 1984.
2.9. Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителей сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов, 1984.
2.10. Методические рекомендации «Использование 0,05-0,1%-ного раствора Твина-80 как разводящей жидкости для определения концентрации спор сибиреязвенного микроба», 1986.
2.11. Методические рекомендации «Определение гемолитической активности у сибиреязвенного микроба», 1989.

2.12. Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции. Основные положения, Госкомсанэпиднадзор РФ, 1995.
2.13. Методические рекомендации «Забор, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики». МЗ РФ, ЦНИИЭ, 2004.
2.14. Методические рекомендации «Взаимодействие органов управления, учреждений и специализированных формирований при ликвидации последствий террористических актов с применением патогенных биологических агентов и опасных химических веществ. МР 0100/3556-04-34», 2005.
2.15. Инструкция по определению чувствительности возбудителей опасных инфекционных заболеваний к антибиотикам и химиопрепаратам, 1990.
3. Общие положения
Сибирская язва (Anthrax) — это острое инфекционное заболевание животных и человека, относящееся к группе особо опасных инфекций. Основным источником инфекции для человека при сибирской язве являются больные травоядные животные. Они в течение всего периода болезни выделяют возбудитель с мочой, испражнениями и слюной в почву, которая становится его дополнительным резервуаром. Заражение животных происходит главным образом алиментарным (через корм и питьевую воду, инфицированные спорами), реже — трансмиссивным (через укусы кровососущих насекомых) и воздушным путями.
В подавляющем большинстве случаев человек заражается сибирской язвой при разделке туш вынужденно убитого скота; употреблении в пищу полученных от него мяса или мясных продуктов; непосредственном контакте с трупами погибших животных, шерстью, шкурами, кожей, щетиной, зараженными возбудителем; уходе за больными животными. Возможно также заражение через укусы кровососущих насекомых, контаминированную почву и при вдыхании содержащего споры аэрозоля.
В зависимости от путей заражения у человека развивается кожная или висцеральная (кишечная, легочная) формы сибирской язвы. Любая из этих форм может приводить к развитию сепсиса и осложняться сибиреязвенным менингитом (генерализованная форма).
Возбудитель этой инфекции в 2001 г. в США был использован как средство биологического терроризма, что привело к человеческим жертвам и возникновению паники среди населения. Поэтому своевременная и точная лабораторная диагностика сибирской язвы приобретает сейчас особое значение.
Диагностика сибирской язвы у человека и животных основывается на эпизоотологических, эпидемиологических, клинических, лабораторных и патологоанатомических данных. Лабораторные исследования направлены на обнаружение и идентификацию возбудителя сибирской язвы, выявление специфических антител и аллергической перестройки в организме больных людей.
3.1. Краткие сведения о возбудителе сибирской язвы
Возбудитель сибирской язвы — B. anthracis, относится к семейству спорообразующих микроорганизмов Bacillaceae, роду Bacillus. В роду Bacillus, насчитывающем 101 вид, выделяют группу видов Bacillus cereus, в которую входят близкородственные B. cereus, B. anthracis, B. thuringiensis, B. mycoides и недавно признанный новым видом психротолерантный микроб B. weichenstephanensis.
Морфология B. anthracis. В зависимости от стадии развития культуры, а также условий окружающей среды возбудитель сибирской язвы может существовать в трех формах — в виде бескапсульных вегетативных палочек (бацилл), инкапсулированных палочек и спор.
В мазках из культур, выросших на питательных средах, палочки (размеры 1-1,5х6-8-10 мкм) расположены длинными цепочками, концы микробов в окрашенных препаратах обрублены и цепочка напоминает бамбуковую трость с коленчатыми сочленениями (Прилож. 7, рис. 1 — не приводится). В мазках из патологического материала палочки расположены поодиночке, попарно или короткими цепочками, окружены хорошо выраженной капсулой, зачастую общей для группы микробов (Прилож. 7, рис. 2 — не приводится).
Спорообразование. При выращивании возбудителя на питательных средах и в условиях окружающей среды при свободном доступе кислорода воздуха, определенной влажности и температуре от 12,0 до 42,5 град. С образуются споры овальной формы размером 0,8-1х1,2-1,5 мкм. В каждой вегетативной клетке (спорангии) образуется только одна спора, располагающаяся центрально, ее диаметр не превышает ширину тела микробной палочки (Прилож. 7, рис. 3 — не приводится).
Процесс спорообразования состоит из четырех основных стадий: подготовительной, образования проспор, готовых спор и зрелых спор. Спорогенез зависит от особенностей штамма, наличия тех или иных питательных веществ, pH среды, температуры выращивания, влажности и др.
При попадании спор в благоприятные условия (влажность, аэрация, температура, наличие необходимых питательных веществ) из них быстро образуются вегетативные клетки. Время прорастания спор может составлять несколько часов и зависит от температуры (оптимум — 37 град. С) и других факторов.
Культурально-биохимические свойства. Сибиреязвенный микроб — факультативный анаэроб, оптимальная температура роста 34-37 град. С, оптимальное значение pH 7,2-7,8, неподвижный, хорошо растет на обычных питательных средах — МПБ и МПА. Характер роста в совокупности с другими признаками учитывается при идентификации.
При посевах на чашки Петри с питательным агаром после суточной инкубации при (36 +/- 1) град. С микроб формирует крупные шероховатые сухие матовые колонии в R-форме, с «шагреневой» поверхностью, с неровными краями и отходящими от них волнистыми отростками. При малом увеличении под микроскопом (7х10) они напоминают локоны волос или львиную гриву (Прилож. 7, рис. 4 — не приводится).
Характерный придонный рост сибиреязвенного микроба в МПБ или 1%-ной пептонной воде похож на комочек ваты, с трудом разбивающийся при встряхивании, при этом бульон остается прозрачным (Прилож. 7, рис. 5 — не приводится).
Сибиреязвенный микроб способен разлагать с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, сахарозу и некоторые другие сахара, но не разлагает лактозу. Обладает относительно низкой протеолитической активностью, и при посеве уколом в столбик 10-12%-ного мясопептонного желатина и выращивании при 22 град. С рост микроба напоминает елочку, опрокинутую верхушкой вниз; на 3-5 день желатин разжижается в виде воронки. Большинство сапрофитов полностью разжижает желатин в более короткие сроки. При росте на кровяном агаре с 3-5% дефибринированной крови барана через 20-24 ч гемолиз не наблюдается, в то время как многие сапрофиты дают быстрый гемолиз (через 12-18 ч при 37 град. С). Большинство штаммов сибиреязвенного микроба не образует фермент лецитиназу. При росте на агаре с куриным желтком вокруг колоний не происходит помутнения среды в виде беловатой зоны, а при посеве на жидкую желточную среду желток не свертывается даже при 5-6-суточном инкубировании. Сапрофиты свертывают желток в течение 6-10 ч. Сибиреязвенный микроб, в отличие от сапрофитных бацилл, обладает низкой фосфатазной активностью и не способен разлагать фосфаты, добавляемые в питательную среду (тест на фосфатазу).
Большинство штаммов сибиреязвенного микроба чувствительно к пенициллину и при выращивании на МПА или МПБ в присутствии 0,5-0,05 ЕД/мл бензилпенициллина через 3 ч инкубирования образует цепочки из шарообразных клеток — «жемчужное ожерелье» (Прилож. 7, рис. 6 — не приводится).
До 95% штаммов сибиреязвенного микроба лизируется сибиреязвенными бактериофагами «Гамма», «К» и Fah-ВНИИВВиМ (Прилож. 7, рис. 7 — не приводится).
Чувствительность к антибиотикам. Возбудитель сибирской язвы чувствителен к большинству антибиотиков — цефалоспоринам I поколения, тетрациклинам, рифампицинам, аминогликозидам и фторхинолонам. Пенициллин способен задерживать развитие сибиреязвенного микроба даже при низкой концентрации в питательной среде. К некоторым макролидам сибиреязвенный микроб умеренно устойчив, а к цефалоспоринам II-IV поколения устойчив.
Факторы вирулентности (агрессии). Возбудитель сибирской язвы обладает почти универсальной патогенностью для млекопитающих — человека и других приматов, сельскохозяйственных и диких животных, лабораторных животных.
Важнейшими факторами патогенности у микроба являются капсула и экзотоксины. Сибиреязвенный микроб образует их в инфицированном макроорганизме или при культивировании на искусственных питательных средах в специальных условиях.
Наличие капсулы необходимо на первых этапах инфекционного процесса для предотвращения опсонизации и фагоцитирования микроорганизма.
Типичные вирулентные штаммы B. anthracis образуют капсулу в организме больных людей и животных, а также при культивировании на 1%-ном бикарбонатно-сывороточном агаре в атмосфере, содержащей 5-50% углекислоты, или на жидкой среде ГКИ, содержащей 40% инактивированной бычьей (лошадиной) сыворотки и 60% раствора Хенкса. На 1%-ном бикарбонатном агаре микроб растет в SM-форме в виде гладких, блестящих, влажных, слизистых колоний с неровными краями (Прилож. 7, рис. 8 — не приводится).
Экзотоксин играет ведущую роль в патогенезе сибиреязвенной инфекции и формировании специфического иммунитета. Сибиреязвенный экзотоксин относится к бинарным двухкомпонентным белковым токсинам