Диагностика вич инфекции презентация

Презентация к уроку на тему:
ВИЧ-инфекция

Предварительный просмотр:

Подписи к слайдам:

ВИЧ-инфекция ВИЧ-инфекция представляет собой заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека, характеризующееся синдромом приобретенного иммунодефицита, способствующего возникновению вторичных инфекций и злокачественных образований в связи с глубоким угнетением защитных свойство организма. ВИЧ-инфекция имеет многообразные варианты течения. Заболевание может длится всего несколько месяцев или растягиваться до 20 лет. Основным способом диагностики ВИЧ-инфекции остается выявление специфических противовирусных антител, а также вирусной РНК. В настоящее время лечение пациентов с ВИЧ проводится антиретровирусными препаратами, способными снижать репродукцию вируса.

ВИЧ-инфекция ВИЧ-инфекция представляет собой заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека, характеризующееся синдромом приобретенного иммунодефицита, способствующего возникновению вторичных инфекций и злокачественных образований в связи с глубоким угнетением защитных свойство организма. Сегодня в мире отмечается пандемия ВИЧ-инфекции, заболеваемость населения планеты, в особенности стран Восточной Европы неуклонно растет.

Характеристика возбудителя Вирус иммунодефицита человека ДНК-содержащий, относится к роду Lentivirus семейства Retroviridae . Различают два типа: ВИЧ-1 является основным возбудителем ВИЧ-инфекции, причиной пандемии, развития СПИД. ВИЧ-2 – малораспространенный тип, встречается в основном в Западной Африке. ВИЧ – нестойкий вирус, Быстро погибает вне организма носителя, чувствителен к воздействию температуры (снижает инфекционные свойства при температуре 56 °С, погибает через 10 минут при нагревании до 70-80 °С). Хорошо сохраняется в крови и ее препаратах, подготовленных для переливания. Антигенная структура вируса весьма изменчива. Резервуаром и источником ВИЧ-инфекции является человек: страдающий СПИД и носитель. Природных резервуаров ВИЧ-1 не выявлено, есть мнение, что естественным хозяином в природе являются дикие шимпанзе. ВИЧ-2 переносится африканскими обезьянами. Восприимчивость к ВИЧ у других видов животных не отмечена. Вирус содержится в высоких концентрациях в крови, сперме, секрете вагинальных желез и менструальных выделениях. Может выделяться из женского молока, слюны, слезного секрета и ликвора, но эти биологические жидкости представляют меньшую эпидемиологическую опасность.

Характеристика возбудителя Вероятность передачи ВИЧ-инфекции повышается при наличии повреждений кожных покровов и слизистых оболочек (травмы, ссадины, эрозия шейки матки , стоматит , парадонтоз и др.) ВИЧ передается с помощью гемоконтактного и биоконтактного механизма естественным путем (при половых контактах и вертикально: от матери к ребенку) и искусственным (преимущественно реализуется при гемоперкутанном механизме передачи: при трансфузиях, парентеральных введениях веществ, травматических медицинских процедурах). Риск поражения ВИЧ при единичном контакте с носителем невысок, регулярные половые контакты с инфицированным его значительно повышают. Вертикальная передача инфекции от больной матери ребенку возможна как во внутриутробном периоде (через дефекты плацентарного барьера), так и в родах, при контакте ребенка с кровью матери. В редких случаях фиксируется постнатальная передача с грудным молоком. Заболеваемость среди детей у зараженных матерей достигает 25-30%. Парентеральное заражение происходит при инъекциях с помощью игл, загрязненных кровью ВИЧ-инфицированных лиц, при гемотрансфузиях зараженной крови, нестерильных медицинских манипуляциях ( пирсинг , татуировки , медицинские и стоматологические процедуры , производящиеся инструментарием без должной обработки). Контактно-бытовым путем ВИЧ не передается. Восприимчивость человека к ВИЧ-инфекции – высокая. Развитие СПИД у лиц старше 35 лет, как правило, происходит в более короткие сроки с момента заражения. В некоторых случаях отмечается невосприимчивость к ВИЧ, что связывают со специфическими иммуноглобулинами А, присутствующими на слизистых половых органов.

Патогенез ВИЧ-инфекции Вирус иммунодефицита человека при попадании в кровь внедряется в макрофаги, микроглию и лимфоциты, имеющие важное значение в формировании иммунных реакций организма. Вирус уничтожает способность иммунных телец к распознаванию своих антигенов как чужеродных, заселяет клетку и приступает к репродукции. После выхода размножившегося вируса в кровь, клетка-хозяин погибает, а вирусы внедряются в здоровые макрофаги. Синдром развивается медленно (годами), волнообразно. Первое время организм компенсирует массовую гибель иммунных клеток, вырабатывая новые, со временем компенсация становится недостаточной, количество лимфоцитов и макрофагов в крови значительно снижается, иммунная система разрушается, организм становится беззащитен как по отношению к экзогенной инфекции , так и к бактериям, населяющим органы и ткани в норме (что ведет к развитию оппортунистических инфекций). Кроме того, нарушается механизм защиты от размножения дефектных бластоцитов — злокачественных клеток. Заселение вирусом иммунных клеток часто провоцирует различные аутоиммунные состояния, в частности характерны неврологические расстройства в результате аутоиммунного поражения нейроцитов , которые могут развиться даже раньше, чем проявится клиника иммунодефицита.

Классификация ВИЧ В клиническом течении ВИЧ-инфекции различают 5 стадий: инкубации, первичных проявлений, латентная, стадия вторичных заболеваний и терминальная. Стадия первичных проявлений может протекать бессимптомно, в виде первичной ВИЧ-инфекции, а также сочетаться с вторичными заболеваниями. Четвертая стадия в зависимости от тяжести подразделяется на периоды: 4А, 4Б, 4В. Периоды проходят фазы прогрессирования и ремиссии, различающиеся в зависимости от имеющей место противоретровирусной терапии или ее отсутствия.

Симптомы ВИЧ-инфекции 1. Стадия инкубации – может составлять от 3 недель до 3 месяцев, в редких случаях удлиняется до года. В это время идет активное размножение вируса, но иммунный ответ на него пока отсутствует. Инкубационный период ВИЧ заканчивается либо клиникой острой ВИЧ-инфекции, либо появлением в крови ВИЧ-антител. На этой стадии основанием для диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение вируса (антигенов или частиц ДНК) в сыворотке крови. 2. Стадия первичных проявлений характеризуется проявлением реакции организма на активную репликацию вируса в виде клиники острой инфекции и иммунной реакции (выработка специфических антител). Вторая стадия может протекать бессимптомно, единственным признаком развивающейся ВИЧ-инфекции будет положительная серологическая диагностика на антитела к вирусу. Клинические проявления второй стадии протекают по типу острой ВИЧ-инфекции. Начало острое, отмечается у 50-90% пациентов спустя три месяца после момента заражения, зачастую предшествуя формированию ВИЧ-антител. Острая инфекция без вторичных патологий имеет довольно разнообразное течение: могут отмечаться лихорадка , разнообразные полиморфные высыпания на кожных покровах и видимых слизистых оболочках, полилимфаденит , фарингит , лиенальный синдром, диарея . У 10-15% больных острая ВИЧ-инфекция протекает с присоединением вторичных заболеваний, что связано со снижением иммунитета. Это могут быть ангины , пневмонии различного генеза, грибковые инфекции , герпес и др. Острая ВИЧ-инфекция обычно длится от нескольких дней до нескольких месяцев, в среднем 2-3 недели, после чего в подавляющем большинстве случаев переходит в латентную стадию.

Симптомы ВИЧ-инфекции 3. Латентная стадия характеризуется постепенным нарастанием иммунодефицита. Гибель иммунных клеток на этой стадии компенсируется их повышенным производством. В это время диагностировать ВИЧ можно с помощью серологических реакций (в крови присутствуют антитела к ВИЧ). Клиническим признаком может быть увеличение нескольких лимфатических узлов из разных, не связанных между собой групп, исключая паховые лимфоузлы . При этом других патологических изменений со стороны увеличенных лимфоузлов (болезненность, изменения окружающих тканей) не отмечается. Латентная стадия может продолжаться от 2-3 лет, до 20 и более. В среднем она длиться 6-7 лет. 4. Стадия вторичных заболеваний характеризуется возникновением сопутствующих (оппортунистических) инфекций вирусного, бактериального, грибкового, протозойного генеза, злокачественных образований на фоне выраженного иммунодефицита. В зависимости от выраженности вторичных заболеваний различают 3 периода течения.

Симптомы ВИЧ-инфекции 4А – потеря массы тела не превышает 10%, отмечаются инфекционные (бактериальные, вирусные и грибковые) поражения покровных тканей (кожи и слизистых оболочек). Работоспособность снижена. 4Б – потери в весе более 10% общей массы тела, продолжительная температурная реакция, возможна длительная диарея, не имеющая органической причины, может присоединяться туберкулез легких , инфекционные заболевания рецидивируют и прогрессируют, выявляется локализованная саркома Капоши , волосистая лейкоплакия . 4В – отмечается общая кахексия, вторичные инфекции приобретают генерализованные формы, отмечается кандидоз пищевода , дыхательных путей , пневмоцистная пневмония , туберкулез внелегочных форм, диссеминированная саркома Капоши , неврологические расстройства.

Симптомы ВИЧ-инфекции Подстадии вторичных заболеваний проходят фазы прогрессирования и ремиссии, различающиеся в зависимости от имеющей место противоретровирусной терапии или ее отсутствия. В терминальной стадии ВИЧ-инфекции вторичные заболевания, развившиеся у больного, приобретают необратимый характер, меры лечения теряют свою эффективность, летальный исход наступает спустя несколько месяцев. Течение ВИЧ-инфекции довольно многообразно, не всегда имеют место все стадии, те или иные клинические признаки могут отсутствовать. В зависимости от индивидуального клинического течения продолжительность заболевания может составить как несколько месяцев, так и 15-20 лет.

Особенности клиники ВИЧ-инфекции у детей ВИЧ в раннем детском возрасте способствует задержке физического и психомоторного развития. Рецидивирование бактериальных инфекций у детей отмечают чаще, чем у взрослых, нередки лимфоидные пневмониты , увеличение легочных лимфоузлов , различные энцефалопатии, анемия. Частой причиной детской смертности при ВИЧ-инфекциях является геморрагический синдром, являющийся следствием выраженной тромбоцитопении . Наиболее частым клиническим проявлением ВИЧ-инфекции у детей является задержка темпов психомоторного и физического развития. ВИЧ-инфекция, полученная детьми от матерей анте- и перинатально протекает заметно тяжелее и быстрее прогрессирует, в отличие от таковой у детей, зараженных после года.

Диагностика ВИЧ-инфекции В настоящее время основным диагностическим методом при ВИЧ-инфекции является выявление антител к вирусу, производящееся преимущественно с применением методики ИФА . В случае положительного результата исследуют сыворотку крови с помощью методики иммунного блоттинга . Это позволяет идентифицировать антитела к специфическим антигенами ВИЧ, что является достаточным критерием для окончательного диагностирования. Невыявление с помощью блоттинга антител характерной молекулярной массы, однако, не исключает ВИЧ. В инкубационный период иммунный ответ на внедрение вируса еще не сформирован, а в терминальной стадии в результате выраженного иммунодефицита антитела перестают вырабатываться. При подозрении на ВИЧ и отсутствии положительных результатов иммунного блоттинга эффективным методом выявления частиц РНК вируса является ПЦР . Диагностированная серологическими и вирусологическими методами ВИЧ-инфекция является показанием к динамическому наблюдению состояния иммунного статуса.

Лечение ВИЧ-инфекции Терапия ВИЧ-инфицированных лиц подразумевает постоянный контроль иммунного статуса организма, профилактику и лечение возникающих вторичных инфекций, контроль над развитием новообразований. Зачастую ВИЧ-инфицируемым лицам требуется психологическая помощь и социальная адаптация. В настоящее время в связи со значительным распространением и высокой социальной значимостью заболевания в государственных и мировых масштабах осуществляется поддержка и реабилитация больных, расширяется доступ к социальным программам, предоставляющим больным медицинскую помощь, облегчающую течение и улучшающую качество жизни пациентов. На сегодняшний день преимущественным этиотропным лечением является назначение препаратов, снижающих репродуктивные способности вируса. К антиретровирусным препаратам относятся: НИОТ ( нуклеозидные ингибиторы транскриптазы) различных групп: зидовудин , ставудин , залцитабин , диданозин , абакавир , комбинированные препараты; НтИОТ (нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы): невирапин , эфавиренз ; ингибиторы протеазы: ритонавир , саквинавир , дарунавир , нелфинавир и другие; ингибиторы слияния.

Лечение ВИЧ-инфекции При принятии решения о начале противовирусной терапии пациентам следует помнить, что применение препаратов осуществляется многие годы, практически пожизненно. Успех терапии напрямую зависит от строгого соблюдения рекомендаций: своевременного регулярного приема лекарственных средств в необходимых дозировках, соблюдение предписанной диеты и строгое следование режиму. Возникающие оппортунистические инфекции лечат в соответствии с правилами эффективной против вызвавшего их возбудителя терапии (антибактериальные, противогрибковые, противовирусные средства). Иммуностимулирующая терапия при ВИЧ-инфекции не применяется, поскольку способствует ее прогрессированию, цитостатики , назначаемые при злокачественных образованиях, угнетают иммунитет. Лечение ВИЧ-инфицированных включает общеукрепляющие и поддерживающие организм средства (витамины и биологически активные вещества) и методики физиотерапевтической профилактики вторичных заболеваний. Больным, страдающим наркоманией , рекомендуется лечение в соответствующих диспансерах. В связи со значительным психологическим дискомфортом, многие пациенты проходят длительную психологическую адаптацию.

Прогноз при ВИЧ-инфекции ВИЧ-инфекция полностью неизлечима, во многих случаях противовирусная терапия дает незначительный результат. На сегодняшний день в среднем ВИЧ-инфицированные живут 11-12 лет, однако тщательная терапия и современные лечебные препараты позволят заметно удлинить срок жизни пациентов. Основную роль в сдерживании развивающегося СПИД играет психологическое состояние больного и его усилия, направленные на соблюдение прописанного режима.

Профилактика ВИЧ-инфекции В настоящее время Всемирная организация здравоохранения проводит общие профилактические мероприятия по снижению заболеваемости ВИЧ-инфекцией по четырем основным направлениям: просвещение в вопросах безопасности половых отношений, распространение презервативов, лечение заболеваний, передающихся половым путем, пропагандирование культуры половых взаимоотношений; контроль над изготовлением препаратов из донорской крови; ведение беременности ВИЧ-инфицированных женщин, обеспечение их медицинской помощи и предоставление им средств химиопрофилактики (в последнем триместре беременности и в родах женщины получают антиретровирусные препараты, которые также на первые три месяца жизни назначаются новорожденным детям); организация психологической и социальной помощи и поддержки ВИЧ-инфицированных граждан, консультирование. В настоящее время в мировой практике особое внимание уделяют таким эпидемиологически важным в отношении заболеваемости ВИЧ-инфекцией факторам, как наркомания, беспорядочная половая жизнь. В качестве профилактической меры во многих странах производится бесплатная раздача одноразовых шприцов, метадоновая заместительная терапия. В качестве меры, способствующей снижению половой неграмотности, в учебные программы вводятся обучающие половой гигиене курсы.

Лабораторная диагностика при ВИЧ-инфекции. презентация составлена на кафедре детских инфекционных болезней Государственного учреждения образования «Белорусская. — презентация

Презентация была опубликована 6 лет назад пользователемwww.belmapo.by

Похожие презентации

Презентация на тему: » Лабораторная диагностика при ВИЧ-инфекции. презентация составлена на кафедре детских инфекционных болезней Государственного учреждения образования «Белорусская.» — Транскрипт:

1 Лабораторная диагностика при ВИЧ-инфекции

2 презентация составлена на кафедре детских инфекционных болезней Государственного учреждения образования «Белорусская медицинская академия последипломного образования» (БелМАПО), Минск, Беларусь (зав. кафедрой профессор А.А. Ключарева) презентация используется при обучении слушателей на курсах повышения квалификации «Лечение и профилактика ВИЧ-инфекции» составитель ассистент Н.В. Голобородько (э-адрес: ) при составлении презентации использованы материалы: скачано с сайта БелМАПО: дата создания презентации – 2005 г., дата последнего обновления: 30 мая 2007 г. данная презентация является только учебным материалом и не может служить справочником по ведению пациентов с ВИЧ-инфекцией; в презентации возможны неточности; авторы не несут ответственности за возможные негативные последствия использования материалов презентации использование и тиражирование данной презентации приветствуется; при использовании хорошим тоном считается ссылка как на нас, так и на авторов процитированных нами материалов

3 Задачи лабораторной диагностики ВИЧ 1.Определить ВИЧ-статус (да/нет) 2.Исследования у ВИЧ-позитивного пациента: определить стадию ВИЧ-инфекции и прогноз течения, сформулировать показания к терапии, проводить контроль эффективности терапии

4 Строение ВИЧ: что же мы определяем лабораторно? две нити РНК(-) ферменты: p66 (RT) обратная транскриптаза (ревертаза) p11 (IN) интеграза p32 (P) протеаза структурные белки: р24 (CA) ядерный Ag (внутренняя оболочка) р17 (MA) матриксный Ag липидная оболочка (внешняя, формируется из оболочки клетки человека при выходе новых вирусов почкованием) с вкраплением белков клетки хозяина рецепторный комплекс: gp41 (TM) трансмембранный гликопротеин gp120 (SU) рецепторный гликопротеин антитела спектр антител к разным белкам ВИЧ

5 Естественное течение ВИЧ-инфекции: клинико-лабораторные параллели пре-СПИД (первые признаки ИД) «асимптомная» инфекция (клиническая латенция) СПИДострая инфекция инк уба ция CD4 VL Ab появление виремии (1-5 сутки от заражения половым путем) появление антител («серологическое окно»,

3-6 недель, до 6 мес)

opt момент старта АРТ пре- СПИД стадия на лечении старт АРТ

6 Как скоро после инфицирования ВИЧ сработают различные тесты? цит. по Р. Торстенссону, Шведский институт по контролю за инфекционными заболеваниями, 2005

7 Тесты для лабораторной диагностики при ВИЧ-инфекции 1.Тесты для диагностики: Скрининговые для определения антител: иммуноферментный анализ (ИФА), в т.ч. быстрые тесты Подтверждающие для определения антител : иммунный блотинг (ИБ); Методы амплификации НК: качественная ПЦР(ДНК-ПЦР) в культуре лимфоцитов крови 2.Тесты для слежения за течением: Методы амплификации НК: количественная ПЦР (РНК-ПЦР, вирусная нагрузка) в плазме Определение иммунного статуса: CD4

8 Кто подлежит обследованию на ВИЧ? доноры иностранцы из очагов: бывшие в половом контакте с ВИЧ+ лицом или в сходных условиях по риску заражения ВИЧ по клиническим показаниям (при наличии оппортунистических инфекций или ряда возможных признаков иммунодефицита) – как пациенты, так и аутопсийный материал получающие частые гемотрансфузии плацентарная кровь, поступающая на переработку дети от ВИЧ+ матерей или оформляющиеся в госучреждения пациенты с ИППП ПИН, МСМ, ЖСБ поступившие в следственный изолятор или приемник-распределитель медработники в случае профессионального контакта все изъявившие пройти обследование, в том числе анонимно Перечень контингентов, подлежащих обследованию на наличие антител к вирусу иммунодефицита человека. Приложение 8 к приказу МЗ РБ от тестирование на ВИЧ добровольное включение добровольное исключение по желанию (запросу) самого пациента предложение от врача с возможностью отказаться

9 Диагностический алгоритм обследования на ВИЧ-инфекцию диагноз исключён консультирование и оценка недавнего риска инфицирования ВИЧ диагноз подтвержден +/– ИФА 1 (скрининг) ИФА 2 (скрининг) ИБ (подтвержда- ющий тест) ++ ––– + – повторное обследование в ИФА/ИБ через месяцев или проведение ДНК ПЦР +

10 Биологические жидкости, в которых можно определять антитела к ВИЧ Сыворотка крови, полученная путем центрифугирования цельной крови Цельная капиллярная кровь (взятая из пальца) Транссудат слизистой полости рта, собранный с помощью специального приспособления (тесты «Oral Fluid», «OMT-EIA») Моча Региональный Учебно-Информационный Центр по проблемам помощи и лечения при ВИЧ/СПИДе в Евразии,

11 ИФА: принцип метода Ag/Ab сорбированные на твердой фазе (ПХВ планшеты на 96 лунок) определяемые Ab/Ag (исследуемая сыворотка) конъюгат фермента и Ab расщепление хромогена с образованием окрашенного комплекса

12 Поколения тестов для ИФА * p24 Ag есть в период окна, а затем появляются и обнаруживаются только anti-p24 – то есть ИФА 4поколения помогает в донорстве и у детей с перинатальным контактом, но он не заменяет ИБ как конфирматорный тест определение Abопределение Ag первоеоснованы на нативном вирусенет второе основаны на рекомбинантных белках или синтетических пептидах нет третье в качестве конъюгата меченные белки ВИЧ нет четвертое в качестве конъюгата меченные белки ВИЧ определяют р24 антиген – то есть работают в период «серологического окна» и используются для тестирования донорской крови

13 ИБ (western blot): принцип метода 1.ЭФ разделение белков ВИЧ-1 (стандартный реагент) по их молекулярной массе специфическое соединение белков ВИЧ с соответствующими отдельными антителами к ВИЧ из добавленной сыворотки 2.Инкубация с добавлением исследуемой сыворотки – специфическое соединение белков ВИЧ с соответствующими отдельными антителами к ВИЧ из добавленной сыворотки 3.Инкубация с добавлением меченных ферментом антител к человеческим Ig 4.Детекция окрашенных полос Э. Фаучи, К. Лэйн, Глава 308 ВИЧ-инфекция

14 ИБ: трактовка результатов Критерии положительного ИБ : CDC/APHL: сочетание 2 полос, соответствующих любым 2 из 3 антигенов ВИЧ – p24, gp41, gp120/gp160 (максимально чувствительный вариант) ВОЗ: сочетание 2 полос, соответствующих gp41 и gp120/gp160 1.Положительный ИБ к ВИЧ-1 2.Отрицательный ИБ (у здорового человека, иммунизированного белками внешней оболочки ВИЧ-1) 3.Сомнительный ИБ (у инфицированного ВИЧ-2) 4.Сомнительный ИБ (наличие антител, перекрестно реагирующих с p24 Ag) 5.Отрицательный ИБ Э. Фаучи, К. Лэйн, Глава 308 ВИЧ-инфекция

15 Быстрые тесты выявляют IgM Ab – то есть даже более чувствительны, чем ИФА 1-3 поколений для экстренного уточнения ВИЧ-статуса в медучреждениях (обследование беременных, поступивших рожать с неизвестным ВИЧ-статусом, и обследование биоматериала при профессиональных контактах) – методикой постановки должен владеть любой акушер дежурной бригады и врач приемного покоя для домашнего использования OraQuick® тестполоска каплю цельной капиллярной крови берут из пальца специальной петлей, переносят во флакон c буфером и перемешивают, там осуществляется реакция, и в окошке считывают результат чувствительность 99,6%, специфичность

100%, время постановки 20 минут «-» тест = здоров, «+» тест => в ИФА и ИБ цит. по A.M. Khalsa, Pacific AIDS Education and Training Center KECK School of Medicine, 2003 в ИФА и ИБ цит. по A.M. Khalsa, Pacific AIDS Education and Training Center KECK School of Medicine, 2003″>

16 Снижение порога доступа к тестированию на ВИЧ Возможность анонимного обследования практически в каждом медучреждении Беларусь«-»: пациенты групп риска (например, ПИН) не всегда мотивированы сдавать кровь в поликлинике Возможность сдать кровь на ПОШ СПб, Россия«-»: за получением результата обращаются не более двух третей сдавших кровь Возможность купить в аптеке быстрый тест некоторые страны ЕС, США «-»: отсутствие консультирования, пациент может напутать даже в простой методике, риск ложных результатов Возможность взять кровь дома самостоятельно и отослать на анализ в лабораторию некоторые страны ЕС, США «-»: отсутствие консультирования, пациент может напутать даже в простой методике проблема: обеспечение качества предоставления услуги ; решения: лабораторный контроль качества (подтверждающий ИБ при «+» быстром тесте, правильная доставка крови в лабораторию) внедрение «горячих линий» для консультирования проблема: приблизить сервис к потребителю ; решения:

17 Самостоятельный забор материала пациентом и отсылка его в лабораторию определение антител в транссудате слизистых полости рта (не в слюне) подержать между щекой и десной несколько минут, отослать в лабораторию и через 2 недели получить результат в лаборатории: ИФА + ИБ 99.97% из 3570 обследованных имели корректный результат определение антител в крови скарификатором проколоть палец и капнуть каплю крови на бумагу запомнить персональный номер данного теста и телефон, запечатать и отослать бумагу в лабораторию (заполненный конверт прилагается) и по телефону узнать результат теста в лаборатории: ИФА + ИБ цит. по A.M. Khalsa, Pacific AIDS Education and Training Center KECK School of Medicine, 2003

18 ПЦР: принцип метода обратная транскрипция РНК в кДНК амплификация выделенного ДНК выделение РНК/ ДНК ВИЧ детекция продукта амплификации (ЭФ, ГИФА, фотометрия при real- time ПЦР)

19 Качественная и количественная ПЦР что определяет материал для исследования клиническое использование качественная ДНК-ПЦР: наличие ДНК ВИЧ, интегрированного в геном клетки- мишени (лимфоцита) – резервуара инфекции культура лимфоцитов крови определение ВИЧ-статуса: — ВИЧ-экспонированные дети (есть антитела, но неясно чьи они); — в период серологического окна – после профессиональных контактов и при наличии клиники острого ретровирусного синдрома (когда у инфицированных ВИЧ антитела еще отсутствуют или субопределяемы) количественная (VL, вирусная нагрузка) РНК-ПЦР: наличие РНК свободных вирионов ВИЧ, находящихся в плазме плазма крови прогнозирование течения ВИЧ- инфекции у пациентов без терапии; контроль эффективности АРТ (стартовая VL и в динамике); выбор тактики родоразрешения у ВИЧ+ беременных

20 Условная градация уровней VL градация уровней VL, копий/мл методом RT-PCR методом bDNA порог определения (для детей > ) > высокая> 55 000 (для детей > 100 000) > 30 000 высокая> 80 000 — 100 000″>

21 Трактовка значений VL Ограничения в трактовке: возможны естественные колебания VL в условиях полного благополучия транзиторное повышение уровня VL могут вызвать появление острого эпизода оппортунистической инфекции или вакцинация VL не является стандартным тестом для диагностики ВИЧ-инфекции Что делать? значимыми колебаниями VL следует считать более 3 раз (например, повышение с 20 тысяч до более чем 60 тысяч копий/мл); при сомнениях, выросла ли VL или осталась на прежнем уровне, следует повторить анализ забор крови на VL следует проводить не ранее чем через 2-4 недели после исчезновения симптомов острой инфекции (если невозможно – то все заборы проводить в примерно схожем клиническом состоянии пациента) или вакцинации результаты определения VL должны заново перепроверяться перед стартом или изменением АРВ терапии диагноз ВИЧ-инфекции, выставленный при обнаружении РНК ВИЧ в крови, должен быть подтвержден стандартными тестами – постановкой качественной ПЦР (определение ДНК ВИЧ) или постановкой ИБ (с повтором ИБ спустя 2-4 месяца после начального сомнительного или отрицательного теста)

1,0 lg (>10 раз) снижение VL ниже порога определения – «release point» » title=»VL на фоне АРТ: контроль эффективности лечения снижение VL >1,0 lg (>10 раз) снижение VL ниже порога определения – «release point» » class=»link_thumb»> 22 VL на фоне АРТ: контроль эффективности лечения снижение VL >1,0 lg (>10 раз) снижение VL ниже порога определения – «release point» 1,0 lg (>10 раз) снижение VL ниже порога определения – «release point» «> 1,0 lg (>10 раз) снижение VL ниже порога определения – «release point» «> 1,0 lg (>10 раз) снижение VL ниже порога определения – «release point» » title=»VL на фоне АРТ: контроль эффективности лечения снижение VL >1,0 lg (>10 раз) снижение VL ниже порога определения – «release point» «>

23 Лабораторное обследование детей, рожденных ВИЧ+ матерями возраст частота выявления ДНК ПЦР у вертикально инфицированных ВИЧ детей частота выявления материнских anti-HIV у неинфицированных детей первые 48 часов17-38% дней50-93% 1-2 мес92-98% (1-е обязат. обслед-е) 4-6 мес (2-е обязат. обслед-е) 9 мес 12 мес 15 мес 18 мес0 целесообразность проведения подтверждающего ИБ для определения (материнских) Ab у экспонированных? исключение диагноза ВИЧ-инфекции снятие с дисп. учета ( 2 отр. ДНК ПЦР) ( 2 отр. ИФА) цит. по Ю.А. Фомину и соавт.

100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т» title=»Особенности VL у детей в целом дети имеют более высокие уровни VL, высокой считается VL > 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т» class=»link_thumb»> 24 Особенности VL у детей в целом дети имеют более высокие уровни VL, высокой считается VL > 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в течение первых 2 лет в среднем на 0,6 lg в год, в течение следующих 4-5 лет в среднем на 0,3 lg в год) начальный эффект на АРТ оценивается как достигнутый при снижении VL более чем на 0,7 lg у детей до 2 лет и более чем на 0,5 lg у детей старше 2 лет цит. по Г.М.Цыгановой, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, РФ 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т»> 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в течение первых 2 лет в среднем на 0,6 lg в год, в течение следующих 4-5 лет в среднем на 0,3 lg в год) начальный эффект на АРТ оценивается как достигнутый при снижении VL более чем на 0,7 lg у детей до 2 лет и более чем на 0,5 lg у детей старше 2 лет цит. по Г.М.Цыгановой, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, РФ»> 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т» title=»Особенности VL у детей в целом дети имеют более высокие уровни VL, высокой считается VL > 100 тысяч копий/мл VL при перинатальной ВИЧ-инфекции: при рождении обычно низкая ( 100 тысяч копий/мл), а затем в течение нескольких лет медленно снижается (в т»>

25 Цитофлюориметрическое определение количества CD4-клеток в проточном цитометре клетки крови разделяются по их размеру (объему) добавленные меченные красителем моноклоновые антитела, соединяясь с комплементарными им CD4 рецепторами лимфоцитов/ моноцитов, вызывают изменение окраски рабочего раствора, что определяется фотометрически

26 Зачем нужно определение CD4? установление стадии (иммунологической категории) ВИЧ-инфекции установление показаний для начала и отмены профилактического лечения оппортунистов установление показаний для начала АРТ слежение за иммунологическим ответом на АРТ (восстановление CD4 при лечении) иммунологическая категория CD4, % от лимфоцитовCD4, клеток/мкл 12 месяцев> 13 месяцев 1 года1-5 лет 6 лет и взрослые отсутствие значимой ИС легкая ИС умеренная («продвинутая») ИС выраженная ИС 13 месяцев 1 года1-5 лет 6 лет и взрослые отсутствие значимой ИС 30 25 1500 1000 500 легкая ИС25-2920-24 1000-1500750-1000 350-500 умеренная («продвинутая») ИС 20-2415-19 750-1000500-750 200-350 выраженная ИС

5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-» title=»Субпопуляции Т-лимфоцитов у детей: диапазоны нормальных значений 5 дней –3 мес4-8 мес1-2 года2-5 лет>5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-» class=»link_thumb»> 27 Субпопуляции Т-лимфоцитов у детей: диапазоны нормальных значений 5 дней –3 мес4-8 мес1-2 года2-5 лет>5 лет лимфоциты, % , х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % , х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-5,41,6-4,20,7-4,2 CD 4, % , х 10*9/л 1,4-5,11,6-4,61,02-3,60,9-2,90,3-2,0 CD 8, % , х 10*9/л 0,6-2,40,7-2,50,5-2,20,6-1,90,3-1,8 B, % 12-22, х 10*9/л 0,2-1,6 CD 16, % 9-16, х 10*9/л 0,09-0,9 5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-«> 5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-5,41,6-4,20,7-4,2 CD 4, % 41-6436-6131-5435-5133-41, х 10*9/л 1,4-5,11,6-4,61,02-3,60,9-2,90,3-2,0 CD 8, % 16-3516-3416-3822-3827-35, х 10*9/л 0,6-2,40,7-2,50,5-2,20,6-1,90,3-1,8 B, % 12-22, х 10*9/л 0,2-1,6 CD 16, % 9-16, х 10*9/л 0,09-0,9″> 5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-» title=»Субпопуляции Т-лимфоцитов у детей: диапазоны нормальных значений 5 дней –3 мес4-8 мес1-2 года2-5 лет>5 лет лимфоциты, % 55-7845-7944-7238-64-, х 10*9/л 2,9-8,83,6-8,82,1-8,32,4-5,91,1-5,9 CD 3, % 60-8757-8453-8162-8066-76, х 10*9/л 2,0-6,52,2-6,51,4-«>

28 Трактовка значений CD4 Ограничения в трактовке: весьма широкий диапазон нормальных значений CD4 на уровень CD4 влияет масса факторов: время суток при заборе, наличие острых заболеваний или вакцинации, вызывающих лейкопению лекарств (например, прием ИНФ-а для лечения ко-инфекции ВГ), стресс, курение, фазы менструального цикла и пр. CD4 в сыворотке не равно CD4 в организме (исследуемый нами сывороточный пул составляет не более 20% всех CD4) нет учета функциональной активности CD4 лимфоцитарные перекресты у детей затрудняют трактовку абсолютных значений CD4 Что делать? забор крови следует проводить в одно и то же время суток, не ранее чем через 1 неделю после исчезновения симптомов острой инфекции (если невозможно – то все заборы проводить в примерно схожем клиническом состоянии пациента) и не ранее чем через 1 неделю после вакцинации не делать заключений на основании единственного результата, а проводить повторное определение CD4 (через месяцев в зависимости от состояния пациента) с клинической интерпретацией при получении сходных результатов у детей первых 6 лет ориентироваться на % содержание CD4, а не на абсолютные значения

29 Лабораторные данные в формулировке показаний к АРТ клиника СПИДа констатация имеющейся иммуносупрессии основное показание к АРТ уровень CD4 ориентируемся при отсутствии клиники (не всегда существует корреляция клиники и CD4 ! – часто возможно в т.ч. появление клинической симптоматики при нормальных/ некритично сниженных CD4 и наоборот) вирусная нагрузкапрогноз при высокой VL вероятно в ближайшем будущем снизятся CD4 и появится клиника CD4 (иммунный статус) – это «расстояние, оставшееся до пропасти» = констатация стадии VL (вирусная нагрузка) – это скорость, с которой движется поезд = прогноз

30 Забор и транспортировка материала исследование V крови антикоагулянт подготовка пробытранспортировка Количество CD4 лимфоцитов 3-5 млЭДТАперемешать (недопущение образования сгустка, но не разрушать клетки!) и закрыть до 4 часов (разрушение клеток! дольше — . ) при комнатной t о (не в холодильнике!) Качественное определение ВИЧ 1-2 млЭДТА (не гепарин!, не цитрат!) перемешать (недопущение образования сгустка, но не разрушать клетки!) и закрыть до 4 суток при +2+8 о С (не замораживать!) Вирусная нагрузка/ Лекарствен- ная резис- тентность 2-3 млЭДТА (не гепарин!, не цитрат!) перемешать и закрыть до 6 ч при +2+8 о С (РНКазы!) выделение плазмы – центрифугирование об/мин 20 мин до 1 суток при +2+8 о С, заморозка: -20 о С – 1 месяц -80 о С – 6 месяцев

31 Забор крови на CD4 и VL в процедурном кабинете ОЦП СПИД процедурный кабинет (забор крови) Ульяновская 3 (район стадиона Динамо), забор крови: Вт, Чт Врачу перед направлением пациента следует предварительно созваниваться с процедурным кабинетом – уточнять о наличии тест-систем и изменениях в графике работы Пациенту с собой иметь заполненное направление от врача лаборатория (консультации по поводу тестов) CD4, ВН и ДНК ВИЧ , любой из врачей-лаборантов резистентность

32 правильное клиническое решение здравый смысл и клиническое мышление тесный контакт клинициста и лаборанта доказательные медицинские рекомендации засилие рекламы методов диагностики от производителей и финансируемых ими «ученых» «врачебные» и «лабораторные» ошибки диагностики

33 Ключевые позиции для усвоения Диагноз ВИЧ-инфекции может быть установлен при серологическом обследовании (рутинное тестирование: два ИФА «+» и подтверждающий тест ИБ «+») или при проведении качественной ПЦР двукратно (обычно тестирование детей, рожденных матерями с ВИЧ, и при профессиональных контактах) При тестировании донорской крови период «серологического окна» можно значительно сократить, применяя ИФА тест- системы 4 поколения (определяющие как антитела, так и антиген ВИЧ) или качественную (ДНК) ПЦР Быстрые тесты позволяют предварительно заподозрить диагноз ВИЧ инфекции и применяются в первую очередь в экстренных ситуациях (обследование беременных, поступивших рожать с неизвестным ВИЧ-статусом, и обследование биоматериала при профессиональных контактах) Уровень CD4, наряду с клинической картиной, используется для определения стадии ВИЧ-инфекции – и это отражено в клинических классификациях ВИЧ-инфекции Подъем вирусной нагрузки может указывать на начало прогрессирования ВИЧ-инфекции (прогноз), но не является констатирующим стадию ВИЧ-инфекции показателем. Вирусная нагрузка – главный показатель эффективности АРТ, обязательно контролируемый на фоне проведения лечения Уровень CD4 и вирусная нагрузка – весьма нестабильные показатели, их клиническая интерпретация возможна только при получении как минимум двух согласующихся результатов в динамике (взятых с интервалом

месяцев, в зависимости от состояния пациента) Качество лабораторных исследований напрямую зависит от соблюдения правил забора и транспортировки материала

Диагностика ВИЧ-инфекции. Значение результатов теста. — презентация

Презентация была опубликована 5 лет назад пользователемucab.org.ua

Похожие презентации

Презентация на тему: » Диагностика ВИЧ-инфекции. Значение результатов теста.» — Транскрипт:

1 Диагностика ВИЧ-инфекции. Значение результатов теста.

2 Методы лабораторной диагностики Определение антител к ВИЧ Выявление вируса и его фрагментов Определение уровня иммуно- супрессии Иммуноферментный анализ (ИФА) Иммунный блот (вестерн-блот) Определение вирусной нагрузки Полимеразная цепная реакция (ПЦР) Определение уровня СД4, СД4/СД8, лимфоцитов Экспресс-тест

3 ПЦР на РНК и ДНК ВИЧ Преимущества: – Позволяет выявить сам вирус – Можно использовать в диагностике у детей младше 18 месяцев – Позволяет оценить вирусную нагрузку – Используется для оценки эффективности терапии

4 ПЦР на РНК и ДНК ВИЧ Недостатки: – Дорогостоящий метод – Проводится только в специализированных лабораториях – Долго ждать результат

5 Тестирование на антитела к ВИЧ Оценивает ответ организма на ВИЧ Методы — ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA) — Иммуноблоттинг (используется вестерн- блоттинг – комбинация иммуноблоттинга и электрофореза)

6 ИФА/ELISA Скрининговое исследование, используется с 1985 г. Преимущества: Просто выполнять Просто автоматизировать Точный результат Дешевле других методов Недостатки: Все положительные результаты необходимо подтверждать другим методом

7 Иммуноблоттинг — подтверждающий метод с 1985 г. Преимущества: Высокая специфичность к ВИЧ – редко дает ложноположительные результаты Недостатки: Долго ждать результат Должен проводиться опытным специалистом Дорогостоящий метод Возможны сомнительные результаты

8 Результаты теста на ВИЧ

9 Результаты тестирования Сообщать необходимо окончательный результат теста Четко объяснять, что означает результат При необходимости повторного забора крови четко и правдиво объяснить, для чего это нужно При четком соблюдении методики тестирования возможность получения ложных результатов минимальна

10 Положительный результат означает: ВИЧ присутствует в организме человека Организм выработал антитела против ВИЧ Не является показателем состояния здоровья человека Означает, что человек может инфицировать другого человека

11 Отрицательный результат означает: Антитела к ВИЧ не обнаружены в крови Возможно, ВИЧ-инфекции нет Антитела вырабатываются в среднем через два- три месяца от момента заражения ВИЧ (период «окна»)

12 Неопределенный результат означает: Нельзя с уверенностью определить результат теста на ВИЧ Необходимо повторное тестирование на ВИЧ через 2-3 недели

13 Причины ложноположительного результата Ревматоидный артрит Рассеянный склероз Системная красная волчанка Сахарный диабет первого типа Болезнь Аддисона Анкилозный спонделит Хронический гепатит Рак (злокачественный, лимфопролиферативный) А также у людей, которым недавно делали: – Прививку против гриппа (в течение последних 30 дней) – Инъекции гаммаглобулина – Переливание крови или пересадку органов

14 Причины ложноотрицательного результата Человек инфицирован недавно, и его организм еще не успел выработать достаточное количество антител к ВИЧ Издержки не абсолютной специфичности и чувствительности тест- систем