Диагностика маркеров гепатитов ифа

Оглавление:

Метод ИФА в обнаружении гепатитов

Современной медицине известно множество заболеваний печени. В число наиболее распространенных и опасных входит ВГС (вирусный гепатит С), поскольку эта инфекция часто развивается бессимптомно и приводит к критическим осложнениям, вплоть до летального исхода. Именно поэтому первостепенное значение имеет своевременная диагностика заболевания, осуществляемая при помощи различных методов, в том числе иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления в крови антител к вирусу.

Констатация HCV-инфекции для диагностики гепатита

В лабораторной диагностике для выявления гепатита С (HCV-инфекции) используют два типа методов:

  1. Серологический, основанный на выявлении антител к вирусу гепатита С (анти-HCV), также называется ИФА (иммуноферментный анализ). Он направлен на обнаружение анти-HCV (маркеров IgM и IgG) применяется и для скрининга, и для диагностики гепатита С. Оба этих маркера могут обнаруживаться в крови (плазме) в разных сочетаниях, что требует правильной клинической интерпретации. Для подтверждения наличия анти-HCV проводится тест RIBA (рекомбинантный иммуноблот).
  2. Молекулярно-биологический, направленный на обнаружение РНК вируса. Тест на РНК HCV-инфекции назначают следующим категориям пациентов:
    • с выявленными анти-HCV;
    • без обнаруженных анти-HCV, но с установленными эпидемиологическими и клиническими данными, требующими исключение острой формы ВГС.

РНК вируса можно выявить в крови уже через 14 дней после инфицирования, то есть до появления анти-НСV, возникающих в течение первых 2-3 месяцев.

Для окончательного подтверждения диагноза (особенно при выявлении лишь одного из двух маркеров HCV-инфекции) специалисты рекомендуют провести через определенное время повторные тесты анти-HCV и РНК HCV.

Выявление гепатита методом ИФА

Для осуществления ранней диагностики вирусных гепатитов, особенно бессимптомных, безжелтушных форм, в сыворотке крови выявляют наличие вирусных белков (антигенов) или антител к ним (вырабатываются иммунной системой при проникновении в организм вирусов) посредством иммуноферментного анализа (ИФА). Это универсальный метод иммунологической диагностики, его суть заключается в исследовании взаимодействия «антиген-антитело». Широко применяется во многих странах мира.

Определение гепатита методом ИФА позволяет не только установить точный диагноз, но и оценить характер заболевания, а также выбрать грамотное и эффективное лечение посредством традиционных лекарственных средств (интерферон, рибавирин), препаратов прямого действия (Софосбувир, Даклатасвир) и их дженериков индийского и китайского производства.

По возможности диагностика вирусного гепатита методом ИФА дополняется ПЦР (полимеразной цепной реакцией), позволяющей определить присутствие в крови РНК вирусов гепатитов.

Насколько точен метод иммуноферментного анализа

По оценкам специалистов, точность метода ИФА составляет 95%, то есть у 95 из 100 пациентов при помощи иммуноферментного анализа можно выявить в крови наличие и количество антител ВГС – IgM и IgG. Если результат положительный, можно диагностировать контакт HCV с организмом (не сам вирус, а именно присутствие в крови антител к нему, что может быть результатом уже перенесенного заболевания).

Однако несмотря на высокую чувствительность метода иммуноферментного анализа (ИФА), у 40% пациентов с положительным результатом вирус может быть не обнаружен, что говорит о сомнительном или ложноположительном результате.

Чтобы подтвердить корректность результатов ИФА, для более точного исследования обнаружения антител к ВГС применяется метод RIBA (рекомбинантного иммуноблоттинга).

Анти НCV core тест

В число эффективных исследований для определения наличия антител к вирусам гепатитов входит анти HCV core, используемый как подтверждающий тест при получении «неопределенных» результатов.

Если в сыворотке крови анти НCV core обнаруживается в разведении 1:1000, с большой вероятностью можно диагностировать положительный результат, то есть заболевание присутствует.

Если же образцы при разведении 1:1000 отрицательные, в разведении 1:200 позитивные, необходимо исследование на наличие вирусной РНК. В этом случае, скорее всего, HCV-инфекции нет.

Важно понимать, что при хронических формах ВГС антитела выявляются постоянно, а при элиминации (выведении из клеток организма) вируса сохраняются на протяжении 4-8 и более лет. Потому наличие анти-HCV не всегда свидетельствует об инфицировании организма и не позволяет делать объективные выводы об активности процесса.Для получения точных данных о вирусной нагрузке, степени поражения печени, длительности инфицирования и различия острой и хронической форм заболевания рекомендуется использовать определение спектра антител к разным HCV пептидам. Также важно пронаблюдать их количественную и качественную динамику.

ИФА на вирусный гепатит

Оставьте комментарий 3,451

Для выявления вирусных гепатитов в организме медицина широко применяет метод иммуноферментного анализа, основанного на выявлении концентрации и вида антигенов с помощью антител и ферментов. Проводится поэтапно, путем лабораторных исследований, с высокой точностью показаний. В зависимости от количества и класса антител изменяется цвет и концентрация фермента, который использует ИФА и, согласно этому, врач диагностирует заболевание.

Что такое ИФА?

Наличие вирусного гепатита в организме больного определяют с помощью серологического метода анализа крови на присутствие вируса HCV и маркеров (тел и антител), на него указывающих. Иммуноферментный анализ (ИФА) исследует разные вирусы, низкомолекулярные соединения, макромолекулы, их качественный и количественный показатели, используя проявление реакции на их антигены. Для этого применяют фермент, как метку для сигнальной регистрации. Его все шире используют в медицине, поскольку ИФА четко находит строго определенные антигены, не путая их с другими, имеет высокую чувствительность к наличию инвазии при вирусном гепатите.

Минус такой диагностики — невозможность выявить причину болезни, так как метод указывает только на реакцию иммунной системы организма. На результаты анализа влияет вакцинация, проведенная ранее. За 8 часов перед проведением анализа рекомендуется воздержаться от приема пищи, никотина, алкоголя. Основа ИФА теста — ферментативная и иммунная реакция организма на вирус. Биологические молекулы связываются с клеткой и ее элементами, микроорганизмами, обнаруживают вирус, далее работают ферменты, которые позволяют выразить иммунную реакцию в видимый и измеримый параметр.

Показания к анализу

Вирусные гепатиты в организме могут стать причиной возникновения онкологических заболеваний и цирроза печени. Важность своевременной диагностики неоспорима. Первичным способом диагностики является тест ИФА, который с высокой точностью определяет наличие HCV вируса (IgM и IgG) и активность его микроэлементов. В обязательном порядке анализы на вирусный гепатит сдают:

  1. Люди с групп риска (наркозависимые, болеющие СПИДом, работники медицинских и правоохранительных учреждений).
  2. Люди с острой или хронической формой гепатита.
  3. Беременные и планирующие беременность женщины.

ИФА распознает болезнь на любой стадии. Результаты анализа, в среднем, готовы за 2 дня.

Критерии, что определяют важность анализа

ИФА тест определяет наличие антител класса IgG, IgM, IgA. При диагностике вирусного гепатита врач не обращает внимания на их тип, так как присутствие любого такого проявления вируса HCV уже указывает на острую или хроническую стадию протекания болезни. На ранних стадиях заболевания повышается уровень IgM (через 5 дней после заражения); на 15—20 день появляются IgG антитела и могут долгое время находиться в крови человека даже после излечения; IgA — появляется через 10—14 дней, снижается после лечения.

В случае, если IgG и IgA обнаруживаются после применения препаратов и их уровень остается в том же показателе — у носителя хроническая форма гепатита. Важным критерием теста будет четкое определение класса имеющихся антител и их количества. На основании этого можно знать не просто о наличие заболевания, но и стадию его развития. Обнаружение таких элементов в крови больного дает возможность назначить правильное и своевременное лечение для предотвращения более тяжелых последствий.

Как проводится?

Выделяют прямой и не прямой тест ИФА. Этапы прямого:

  1. Сбор биологического материала и размещение его в специальных лунках.
  2. В течение 15—30 мин. антигены прикрепляются к поверхности лунок.
  3. Добавление антител в лунки к найденному антигену. Оставляется все на 1—5 часов.
  4. Удаления неприкрепленных антигенов (выливание содержимого лунок).
  5. Ополаскивание лунок специальным раствором.
  6. Добавления ферментного раствора в лунки. Оставляют на 30 мин.—1 час.
  7. Использование колориметрии (выявление цвета и концентрации окраса содержимого лунки, сопоставление с показателями, которые прямо пропорциональны с концентрацией вируса).

Использование для диагностики непрямого метода ИФА даст более точный результат.

Непрямой метод ИФА проходит при применении немеченных антител к найденным антигенам и впоследствии добавлении к ним меченных. Сначала берется кровь у пациента и разносится по лункам на 15—30 мин. (антитела фиксируются с лунками). Потом в них вносятся немеченные антитела на 1—5 часов (образуется связь антител с антигенами — иммунный комплекс). Далее не прикрепленные микроэлементы выливаются с лунок и промываются специальным раствором. На следующем этапе лаборант добавляет в лунки меченные микроэлементы на 15—30 мин. (при этом связываются немеченные с меченными с образованием комплекса «антитело-антитело-антиген»). Повторно удаляются лишние (незакрепленные) при сливании и промывке раствором. Далее вносится фермент, который меняет цвет за 5—30 мин. пребывания в лунках и данные окраса сверяются с данными показателей таблиц. Непрямой метод ИФА более точный.

Что показывает ИФА при анализе на вирусный гепатит?

Иммуноферментный анализ позволяет выявить наличие инфекции (вирусы гепатита всех видов, ВИЧ, герпес, сифилис, цитомегаловирус, корь, краснуху, вирус паротита, вирус Эпштейн-Барра), является маркером аутоиммунных заболеваний, раковых клеток. Указывает на нарушения репродуктивных функций (изменения уровня тестостерона, пролактина, эстрадиола и прогестерона), сбой работы щитовидной железы, инвазию гельминтами, хламидиями. Эффективен для выявления уреаплазмоза, коклюша, вируса Данге, вируса Западного Нила, Боррелии. Список определений высок, включает много наименований.

Подтверждение результатов

Определение антигена вируса HCV методом ИФА дает 98% точность. Его также используют для повторного тестирования биологического материала при нечетких предыдущих показателях. Наличие IgM антигенов не является показателем на гепатит острой формы и требует дополнительных исследований. При повторном проведении ИФА теста результаты совпадают на 90—100%. В случаях минимального расхождения как показатель принимается среднее значение. Для получения максимальной точности в показателях врачи советуют параллельно проводить биохимический анализ крови. Для проверки результатов после иммуноферментного анализа можно использовать другие способы диагностики.

Диагностика маркеров гепатитов ифа

РНК ВГА, копий/мл

Острый гепатит А , бессмиптомные формы ГА.

+ в фекалиях за 10 дней до клинических симптомов, исчезает через неделю после появления желтухи.

+ в последние 5-10 дней инкубационного периода и на протяжении 6-7 месяцев от начала заболевания

+ РНК ВГА в среднем может определяться до 95 дней.

Иммунитет после вакцинации

+ в первые 2 месяца после вакцинации

Иммунитет после перенесенного ГА

+ с 3-4 недели на всю жизнь, обеспечивая защиту.

Маркеры гепатита с

ВГС – сложный флавивирус с однонитчатой положительной РНК, состоящей из 10 000 нуклеотидов, которые кодируют три структурных (капсидных) белка (С, Е1, Е2) и пять функциональных белков (NS2, NS3, NS4, NS5). Особенность ВГС — высокая гетерогенность его генома.

Для диагностики ВГ методом ИФА выявляютмаркеры ВГС: антитела к вирусу ГС анти-ВГС : анти-ВГС IgМ, анти-ВГС IgG, и РНК-ВГС методом ПЦР. Антигены вируса из-за его крайне низкой концентрации в крови при ГС не доступны выявлению с помощью современных методов индикации. В качестве антигенов используют капсидные (С22) и функциональные(NS3, NS5), полученные при помощи рекомбинантной технологиии или синтеза. К настоящему времени разработаны 4 поколения тест-систем ИФА, но ИФА первого поколения из-за низкой чувствительности не используют.

РНК-ВГС — самый ранний маркер инфекции, может быть обнаружен методом ПЦР через 1- 2 недели после инфицирования, незадолго до повышения уровня сывороточных трансаминаз. Выявление РНК ВГС считается «золотым» стандартом в диагностике ГС и подтверждением положительных результатов обнаружения анти-ВГС. В настоящее время для индикации РНК ВГС используется ПЦР в качественном и количественном варианте, их чувствительность достигла 10-50 копий РНК в 1 мл крови

Анти-ВГС обнаруживаются ИФА к 5-6 неделе после начала гепатита в 80% случаев и к 12 неделе у 90% лиц. Однако при этом возможны ложноположительные реакции. Для их отличия от истинных, используют – рекомбинантный иммуноблотинг для определение спектра белков анти-ВГС. Диагноз хронического ГС у лиц с наличием анти-ВГС обычно ставится на основании повышенных печеночных проб в течение более 6 месяцев.

Определение маркеров гепатитов В,С, ВИЧ, сифилиса

Исследования актуальны как с целью диагностики заболеваний, так и при проведении профилактических осмотров.

HBs-Ag – поверхностный антиген вируса гепатита В, основной маркер острого и хронического гепатита В

В большинстве случаев HBs-Ag обнаруживается уже в инкубационном периоде и при остром течении гепатита выявляется в крови в течение 5-6 месяцев. Обнаружение поверхностного антигена вируса гепатита В в крови дольше 6 месяцев после начала болезни свидетельствует о возможной хронизации процесса. Возможно пожизненное носительство HBs-Ag.

HBs-Ag способен активировать клеточные протоонкогены. Через достаточно длител ьный срок (более 20 лет) возможно развитие гепатокарциномы. Тест на HBs-Ag является качественным.

anti HCV – суммарные антитела (IgM, Ig G) к вирусу гепатита С

Антитела класса М начинают вырабатываться через 4-6 недель после инфицирования, их концентрация быстро достигает максимума. По прошествии 5-6 месяцев уровень IgM падает и повышается вновь во время следующей реактивации инфекции. Антитела класса G появляются с 11-12 недели после инфицирования, достигают пика концентрации к 5-6 месяцу и сохраняются в крови на более-менее постоянном уровне в течение всего периода болезни и реконвалесценции. Таким образом, суммарный уровень антител определяется с 4-5 недели после инфицирования и далее. Тест на суммарные антитела к гепатиту С является качественным.

АГ/АТ ВИЧ -1,2- антитела, возникающие в организме в ответ на инфицирование вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ)

В тесте проводится качественное определение антител к антигенам ВИЧ 1 и 2 типа и антигена р 24 ВИЧ.

Антитела к ВИЧ начинают обнаруживаться в крови инфицированного человека обычно через 3-6 недель, почти всегда выявляются через 12 недель, в редких случаях они появляются только через несколько месяцев и более после попадания вируса в кровь. Также их количество может заметно снижаться в терминальном периоде заболевания. В редких случаях ВИЧ-инфекции антитела могут исчезать на длительный срок.

Суммарные АТ к возбудителю сифилиса — специфический тест , выявляющий антитела к антигенам бледной трепонемы

Результаты ИФА теста, выявляющего суммарные (IgM, Ig G) антитела к антигенам Treponema pallidum, позволяют лабораторно подтвердить диагноз сифилиса при первых клинических проявлениях сифилиса и появлении твердого шанкра. Реакция становится положительной в конце 3-й или 4-й недели после появления первичной сифиломы- первичный серопозитивный период сифилиса. Это чувствительный и специфичный метод ранней диагностики заболевания. После перенесенного заболевания антитела сохраняются пожизненно.

Тест на суммарные АТ к возбудителю сифилиса является качественным.

ПЦР– диагностика бактериальных и вирусных инфекций

Анализ ПЦР позволяет определить наличие инфекционных заболеваний. Данный вид исследования позволяет определить наличие таких заболеваний, как гепатит, хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, молочница, трихомоназ, ВИЧ, герпес. Для проведения клинического исследования осуществляют забор различных материалов – мазок и кровь. Для выявления инфекций, передающихся половым путем, берут мазок из половых органов, шейки матки и мочеиспускательного канала. Определить такие заболевания, как гепатит С, ВИЧ позволит забор венозной крови. Анализ ПЦР сегодня — самый достоверный способ удостовериться о наличии заболеваний, передающихся половым путем.

Как подготовиться к сдаче анализа ПЦР

Перед сдачей анализа ПЦР рекомендуется воздержаться от полового контакта минимум три дня, не мочиться за два часа до сдачи анализа. Женщинам рекомендуется воздержаться от исследования во время менструации и сдать анализ через 5 дней после ее окончания.